Mục lục bài viết
Update: 2022-03-20 06:50:18,Quý khách Cần biết về Hệ dung môi trong sắc ký lớp mỏng dính. You trọn vẹn có thể lại Báo lỗi ở phía dưới để Tác giả đc tương hỗ.
Sắc ký lớp mỏng dính trong hóa thực vậtSẮC KÍ LỚP MỎNG(THIN LAYER CHROMATOGRAPHY) µ A. Mục tiêu: Cơ chế chính trong SKLM Trang thiết bị trong SKLM Các bước tiến hành SKLM Phạm vi ứng dụng của SKLM Ứng dụng SKLM trong hóa thực vậtB. Nội dung:I. KHÁI QUÁT CHUNG:Sắc ký lớp mỏng dính (thin layer chromatography – TLC) còn gọi là sắc ký phẳng(planar chromatography), là kỹ thuật sắc ký khá nhanh gọn và tiện lợi. Nó giúp nhậnbiệt nhanh về số lượng thành phần có trong hỗn hợp đem sắc ký… determining theirpurity and the following the grogress of reaction. It also permits the optimization ofthe solvent system for the given seperation problem. In comparison with the columnchromatography, it only requires small quantities of the compound and is muchs fasteras well. Trong phương pháp sắc ký lớp mỏng dính, thành phần trong hỗn hợp được xác địnhnhờ so sánh thông số lưu của hỗn hợp Rf và thông số lưu Rf của một số trong những chất đã biết. Định nghĩa:TLC là một phương pháp sắc ký dùng chất hấp phụ làm pha tĩnh trản thành lớpmỏng trên tấm kính, nhựa hay sắt kẽm kim loại. Quá trình tách những chất xẩy ra khi pha động làdung môi dịch chuyển qua pha tĩnh. Do đó, TLC là sắc ký lỏng, trọn vẹn có thể là sắc ký lỏng –lỏng hay sắc ký lỏng – rắn.Về mặt lý thuyết cũng như về chủng loại những pha tĩnh và pha động, về mặt TLC vàsắc ký lỏng trên cột khá giống nhau. Vì thế TLC trọn vẹn có thể vốn để làm tìm những Đk tốiưu cho việc tách bắng sắc ký lỏng trên cột.II. CÁC CƠ CHẾ TRONG SẮC KÝ LỚP MỎNG:Phương pháp sắc ký lớp mỏng dính gồm có:Pha tĩnh là chất hấp phụ trải thành lớp mỏng dính, mịn, giống hệt được cố định và thắt chặt trênphiến kính, sắt kẽm kim loại hay nhựa; thường là silicagel, aluminium oxide, hoặc cellulosephủ trên mặt phẳng chất trơ. Pha động là một hệ dung môi đơn thuần hay hỗn hợp nhiều dung môi phối hợp vớinhau theo tỷ trọng quy định. Sắc ký được tiến hành khi cho pha động dịch chuyển qua pha tĩnh trên này đã đặt cácchất phân tích. Trong quy trình sắc ký những cấu tử trong mẫu thử dịch chuyển trên lớpmỏng theo phía pha động với những vận tốc rất khác nhau dẫn đến việc tách – phân bốkhác nhau trên lớp mỏng dính. Kết quả thu được một sắc ký đồ trên lớp mỏng dính, ở đó cácthành phần của mẫu thử phân bổ rãi rác theo những lối đi của dung môi động.Dựa vào cơ chế, TLC phân thành 4 loại:Sắc ký hấp phụSắc ký phân bốSắc ký trao đổi ionCBHD: Nguyễn Thị Diệp Chi1Sắc ký lớp mỏng dính trong hóa thực vậtSắc ký rây phân tửII.1 Sắc ký hấp phụSự tách đa phần nhờ vào ái lực hấp phụ rất khác nhau của những chất so với chất hấpphụ rắn (pha tĩnh) và được biểu thị trải qua hằng số hấp phụ.Trong sắc ký hấp phụ, pha tĩnh là chất rắn có khă năng hấp phụ. Chất tan bị giử lạitrên mặt phẳng pha tĩnh (chất hấp phụ) và bị dung môi động đẩy ra (phản hấp phụ). Mứcđộ tách trong sắc ký hấp phụ phụ thuộc nhiều về mặt phẳng của chất hấp phụ đã được tánnhỏ nên bột chất hấp phụ phải rất mịn. Silicagel và nhôm oxide là những chất hấp phụhay được sử dụng, nhất nhưng silicagel được sử dụng hơn hết. Đây là hai chất hấp phụ ưanước nên những chất cần tách càng phân cực càng bị lưu giữ mạnh và ra chậm khi phảnhấp phụ.Sự hấp phụ những dung dịch không đơn thuần và giản dị như so với chất khí vì chất được hòatan và dung môi tranh giành nhau những điểm hấp phụ trên mặt phẳng chất hấp phụ. Do đótrong quy trình khai triển, pha động chạy qua pha tĩnh, những chất cần tách hòa tan trongdung dịch bị hấp phụ giử lại trên mặt phẳng chất hấp phụ rắn trong lúc dung môi là chấtlỏng luôn di động kéo theo chất phân tích nhiều hay ít tùy thuộc vào lực phản hấp phụcủa dung môi và đặc tính của chất cần cần phân tích. Như vậy, quy trình sắc ký là quátrình hấp phụ và phản hấp phụ liên tục trên mặt phẳng chất hấp phụ cho tới khi đạt tớitrạng thái cân đối và dẫn tới sự phân bổ rất khác nhau của chất phân tích trên lớp mỏng dính.Cân bằng nầy phụ thuộc nhiều vào áp suất, nhiệt độ và nồng độ.Khi hệ dung môi có chứa chất khác ngoài chất phân tích và những chất nó lại gầnnhau về mặt hóa học, có ái lực tương tự và mạnh hơn so với chất hấp phụ thì xảy rasự tranh giành mặt phẳng chất hấp phụ. Chất có ái lực mạnh sẽ đẩy chất yếu hơn về phíatrước làm cho mặt phẳng chất hấp phụ không tồn tại khoảng chừng trống và sắc kí đồ tạo thành vếtdài. Chính hiện tường này làm cho vận tốc dịch chuyển và khả nắng tách của những chấttrong sắc kí hấp phụ phụ thuộc nhiều vào sự xuất hiện của tạp chất hơn là sắc ký phân bổ.II.2 Sắc ký phân bốSắc ký phân bổ là yếu tố phân tách của một hỗn hợp giữa hai pha chất lỏng luôn tiếpxúc với nhau nhưng không hòa tan vào nhau.Trong sắc ký phân bổ, pha tĩnh là một chất lỏng không hòa tan với pha động (dungmôi) và được gắn vào một trong những chất mang thích hợp. Pha động chuyển dời trên pha tĩnhkéo theo những chất cần tách và những chất này được phân bổ giữa hai pha cho tới khihình thành trạng thái cân đối. Hằng số cân đối tùy thuộc vào dung môi và bản chấtchất phân tách. Phuơng trình Nerst chỉ ra sắc ký phân bốự phân bổ của một chất giưữa hai pha lỏngkhông hòa tan vào nhau.constCC==22α Trong số đó α là thông số phân bổ: C1, C2 là nồng độ chất tan trong 2 phaHệ số phân bổ tác động lớn đến vận tốc dịch chuyển của chất.Mổi chất có một thông số phân bổ rất khác nhau, do đố khi khai triển sắc ký, những chấttrong hỗn hợp sẽ dịch chuyển nhanh hay chậm trên pha tĩnh và từ từ tách xa nhau.Chú ý:Chú ý:CBHD: Nguyễn Thị Diệp Chi2Sắc ký lớp mỏng dính trong hóa thực vậtSắc ký trên những lớp mỏng dính có tẩm những chất ưa dầu như parafin là một phươngpháp phân bổ. Ở đây do xuất hiện của một pha tĩnh không phân cưc và một pha di độngphân cực nên gọi là sắc ký pha hòn đảo, dùng tách những chất kỵ nước.Khi sử dụng sắc ký phân bổ để tách một hỗn hợp những chất ưa nước, thườg dùngpha tĩnh là nước, pha động là một dung môi hữu cơ không hòa tan trong nước nhưngcó cho thêm nước hay đã làm bão hòa nước.Khi cần tách những chất có độ phân cực trung bình, người ta dùng một số trong những dungmôi phân cực không mờ hơi làm pha tĩnh như formamid, polyethylenglycol (PEG),pha động là những chất lỏng không phân cực Trong TLC thường gặp những hiện tượng kỳ lạ phân bổ và hiện tượng kỳ lạ hấp phụ chồng chéonhau khi sử dụng nước làm dung môi và chất hấp phụ có hoạt độ kém, sự phân bổ xảy ratrước sự hấp phụ.II.3 Sắc ký trao đổi ion: Pha tĩnh trong sắc ký trao đổi ion là những chất có kĩ năng trao đổi ion (nhựa traođổi ion hoặc dẫn chất của cellulose) với ion chất cần tách trong dung dịch phân tích . Sự phân tách ở đây xẩy ra do ái lực rất khác nhau của những ion trong dung dịch cần táchvới những ion trong pha tĩnh.sự trao đổi ion này được đặc trưng bằng hằng số trao đổi ionNhựa trao đổi ion hay được sử dụng làm pha tĩnh hơn hết. Các nhựa này còn có chứa cácnhóm hóa học trọn vẹn có thể trao đổi được với những ion trong dung dịch chất phân tích. Tùytheo kĩ năng trao đổi với cation hay anion của nhựa trao đổi ion (ionit) mà ta cónhựa trao đổi cation (cationit) hay anion (anionit) . Cationit có 2 loại : cationit acid mạnh có nhóm – HSO3 được ứng dụng rộng tự do, cationit acid yếu có nhóm – COOH-H+ Anionit cũng luôn có thể có 2 loại : anionit base mạnh có nhóm amoni bậc 4 – (CH3)3+OH- và anionit yếu có nhóm amin bậc 2 hay bậc 3. Phản ứng trao đổi giữa cationit R với cation (ví dụ với ion natri) xẩy ra như sau : R – H+ + Na+ R – Na+ + H+Phản ứng trao đổi giữa anionit R với anion (ví dụ ion clorid) xẩy ra như sau: R – OH- + Cl- R – Cl- + OH-Trong sắc ký trao đổi ion, người ta cho dung dịch chứa những ion cần tách chạy qua cộtnhựa đã lựa chọn. Các ion của nhựa sẽ trao đổi với những ion của dung dịch . Các ion đãtrao đổi này phần lớn nằm trong dung dịch và sẽ tiến hành hấp phụ khá nhanh ở dỉnh cột .Sau đó dùng một dung môi thích hợp cho chảy qua cột để phản hấp phụ những ion nàyII.4 Sắc ký rây phân tử: Sự tách dựa vào kích thước phân tử chất tan để lọt sâu vào trong những lỗ hoặc cáchốc của pha tĩnh. Các chất có kích thước phân tử nhỏ thì lọt vào trong hốc của pha tĩnhvà bị giữ lại này sẽ ra sau. Các chất có kích thước phân tử lớn sẽ nằm ngaòi những hốc nàydo này sẽ ra trước. Pha tĩnh là những gel, hay gặp gel sephadex dung để tách những chất có phân tửlươngj rất khác nhau.Một số laọi gel Sephadex được dung trong TCL như G-50, G-75, G-100, G-150, G-200.III .TRANG THIẾT BỊ III.1 .Chất hấp phụ Chất hấp phụ giữ những chất được hấp phụ bởi những lực tĩnh điện, những lựcnày gây ra sự gắn bó của mạng tinh thể. Các lực tĩnh điện mặt phẳng tạo ra những momenlưỡng cực trong những hợp chất không phân cực hay làm tăng những momen đã cóCBHD: Nguyễn Thị Diệp Chi3Sắc ký lớp mỏng dính trong hóa thực vậtsẵn trong những hợp chất phân cực. Nhờ đó, những lưỡng cực ion những lực sinh ra giữa2 lưỡng cực là nguyên nhân sinh ra sự link giữa chất bị hấp phụ và mặt phẳng của chấthấp phụ. Đôi khi những cầu hydro cũng tham gia vào sự link giữa chất hấp phụ vàchất bị hấp phụ. Hàm lượng nước trong chất hấp phụ có vai trò quyết định hành động tới hoạt độcủa những chất hấp phụ vì những phân tử nước dễ bị hấp phụ nên dễ chặn những điểm hoạtđộng trên mặt phẳng chất hấp phụ Chất hấp phụ dùng trong sắc ký lớp mỏng dính là loại bột rất mịn (cỡ hạt 5 – 40µm ).Có nhiều loại chất hấp phụ được sử dụng trong sắc ký lớp mỏng dính, tại đây trình làng mộtvài loại thông dụng : III.1.1. Silicagel : Là chất hấp phụ thông dụng nhất. Cũng như những chất hấp phụ khác, silicagel cónhững “TT hoạt năng” hợp thành bởi những góc, cạnh những lỗ xốp hay điểmkhuyết ở mặt phẳng, ở những nơi đó, ion dễ lòi ra ngoài. Mặt khác silicagel được điều chếtừ tủa keo acid silisic ngưng tụ, keo này còn có chứa những phân tử nước trong khe của cácmạng tinh thể. Khi được sấy, một phần nước bốc hơi, bị vô hiệu thoát khỏi mạng tinh thểnhưng cấu trúc vẫn không thay đổi, nước bốc hơi tạo thành những lỗ hổng có tác dụng hútrất mạnh những phân tử nước hay phân tử những chất phân cực khác vào khung cấu trúc củanó. Kích thước hạt tác động tới vận tốc dịch chuyển, kích thước lỗ hổng ảnh hưởngnhiều đến kĩ năng hấp phụ. Silicagel dùng cho TLC trên thị trường thường có kíchthước hạt từ 5 – 40µm và được loại tạp chất như sắt, nhôm… Hơn nữa, trên bề mặtcủa silicagel có những nhóm OH tự do làm cho lớp mỏng dính có tính acid nhẹ (pH 4-5), dođó, khi phân tích những chất có tính base cần để ý vì những chất này thường bị giữ lại ởđường khởi điểm. Để khắc phục, người ta dùng những pha động có tính kiềm hoặc thêmmột lượng KOH hoặc dung dịch đệm calci hydroxyd hoặc natri citrat vào silicagel khitráng bản mỏng dính. Để mở rộng phạm vi vận dụng cho TLC, người ta còn gắn những mạchhycarbon (có từ 2-18 cacbon) vào nhóm OH trên mặt phẳng của silicagel (silan hóa) để tạora những pha tĩnh không phân cực dùng trong sắc ký lớp mỏng dính pha hòn đảo (RPTLC -Reversed phase thin layer chromatography) như RP-2,…. RP-18 . Có trường hợp,người ta còn cho tẩm silicagel với 20% bạc nitrat và có hoặc không tồn tại 10% chất dínhcalci sulffat. Loại này dùng tách những chất chứa link đôi ( đồng phân cis- trans vàmức độ bão hòa). Tóm lại, kĩ năng hấp phụ của silicagel phụ thuộc cỡ hạt, trạng thái mặt phẳng vàhoạt năng của nó. Silicagel có loại không tồn tại chất dính, có loại có thêm chất dính để cố định và thắt chặt bảnmỏng. Chất dính thông dụng là calci sulfat (bột bó)với tỷ trọng 5 – 15%. Ngoài ra còn chothêm những chất thông tư huỳnh quang như kẽm silicat ở bước sóng 254nm hoặc muốinatri của acid hydroxypurene – sulfonic ở 366nm, silicagel loại này dược ký hiệu làF254 hoặc F366. Đôi khi người ta còn cho thêm một số acid như acid oxalic, acid sulfuricvào silicagel khi tráng bản mỏng dính để tách những hợp chất acid hoặc tẩm bản mỏng dính với dầuparafin, silicon…để tách những chất ưa dầu. Có nhiều hãng sản xuất silicagel dùng cho TLC. Dưới đấy là một số trong những loạisilicagel dùng trong TLC hay gặp : a) Silicagel có chất dính CBHD: Nguyễn Thị Diệp Chi4Sắc ký lớp mỏng dính trong hóa thực vậtSilicagel có 13% bột bó,loại này thông dụng nhất : Silicagel G (Anasil) ;Silicagel G (loại 60) của Merck…Silicagel có 5% bột bó, đóng gói 1,5kg : Silicagel D-5, DS-5 (Camag)b) Silicagel có chất dính và chất thông tư huỳnh quang. Silicagel có 13% bột bó và chất thông tư huỳnh quang : Silicagel GF254 (Merck,Anasil) c) Silicagel không tồn tại chất dính Silicagel H của Merck, Anasil,D-O (Camag) Loại này kém bền vữngd) Silicagel không tồn tại chất dính, có chất thông tư : HF254 (Merck),DF-O (Camag)e) Silicagel đã silan hóa dùng cho TLC pha hòn đảo: PF254 silanized RP -2…Silicagel được bán ở dạng gói 500g, 1kg, 5kg hay ở dạng bản mỏng dính tráng sẵn trênkính, nhôm, polyester. Gần đây trên thị trường còn bán bản mỏng dính hiệu năng cao vớicác loại chất hấp phụ rất khác nhau nhưng đa phần là Silicagel và C18 III.1.2.Nhôm oxyd : Sau silicagel, nhôm oxyd là loại chất hấp phụ hay được sử dụng. Nhôm oxyd là loạichất hấp phụ có hoạt tính cao. Người ta sản xuất nhôm oxyd ở 3 dạng nhôm oxydkiềm, acid và trung tính dể tách những loại hợp chất rất khác nhau. Khi dùng nhôm oxyd, đểcó kết quả tái diễn tốt, nên phải trấn áp được tỷ trọng nước trong nhôm để đảm bảođược hoạt độ của nó. Muốn vậy, cần hoạt hóa bản mỏng dính ở 75 – 1100C trước lúc sử dụng.Loại thường dùng là nhôm oxyd trung tính, nó trọn vẹn có thể tách những hợp chất terpen,alcaloid, chất béo và nhân thơm. Nhôm oxyd mất hết hoạt tính được vốn để làm phân tíchcác chất phân cực như acid amin. Cũng như silicagel, nhôm oxyd cũng rất được trộn chất dính hay là không trộn chấtdính, có hoặc không tồn tại chất thông tư huỳnh quang và cũng luôn có thể có những ký hiệu như silicagel.Ví dụ nhôm oxyd G (có chất dính), GF (có chất dính và chất thông tư huỳnh quang).Ngoài ra còn tồn tại nhôm oxyd loại T (có chất dính, không tồn tại thông tư huỳnh quang) dùngđể tách những peptid, steroid. Các bản mỏng dính nhôm oxyd tráng sẵn trên kính cũng rất được bán trên thị trường. III.1.3. Cellulose: Silicagel và nhôm oxyd là 2 chất hấp phụ vô cơ đa phần để tách những chất béohoặc những chất hòa tan trong dung môi hữu cơ. Cellulose lại là một chất hấp phụ hữucơ đa phần dùng tách những chất thân nước như đường, amino acid,ion vô cơ, dẫn chấtacid nucleic. Lớp mỏng dính cellulose được gắn trên tấm kính, nhựa , nhôm không khácnhiều so với sắc ký giấy. Dung môi khai triển, thuốc thử phát hiện dùng cho lớp mỏngcellulose tựa như sắc ký giấy. Quá trình tách xẩy ra trên cellulose đa phần là quátrình phân bổ. Có 2 loại bột cellulose phù thích phù hợp với TLC là cellulose dạng sợi tự nhiênvà cellulose vi tinh thể . Việc vận dụng so với 2 loại cellulose này đôi lúc không giốngnhau.Một số loại cellulose đã được xử lý hóa học dùng cho TLC được bán trên thịtrường như: Cellulose dạng sợi ‘’Cellulose 300’’, Microcrystalline, tên thương mại làAvicel, DEAE (Diethylaminoethyl), carboxymethyl (CM) là những chất hấp phụtrao đổi ion được sử dụng rộng tự do để tách những chất có phân tử lượng lớn. Acetylatedcellulose dùng cho sắc ký pha hòn đảo. III.1.4. Kieselgur hay cát biển: Là loại bột nhẹ, màu vàng xám chứa khoảng chừng 70-95% SiO2, phần còn sót lại gồm cácoxit nhôm, Fe, Mg, Ca, P, S Các tính chất, thành phần, haọt độ và kích thước củahạt Kieselgur thay đổi tùy từng hãng sản xuất. Kieselgur là một chất hấp phụ yếu,CBHD: Nguyễn Thị Diệp Chi5Sắc ký lớp mỏng dính trong hóa thực vậtdùng tách những chất phân cực như cetoacid, lacton, và thường dùng làm chất men chopha tĩnh trong sắc ký phân bổ. Đôi khi người ta còn sử dụng hỗn hợp Kieselgur – thạchcao và Kieselgur –silicagel với tỉ lệ 1:1 III.1.5. Thạch caoĐược điều chế bằng phương pháp trộn dung dịch CaCl2 và H2SO4 với tỉ lệ đồng phân tử,đun 70-80oC , gạn lấy CaSO4, rửa tới trung tính, sấy 48 giờ ở 115-1200C. III.1.6. Các chất khác: Polyamid: Khả năng tách trên lớp mỏng dính polyamid tùy từng lực liênkết hydro được hình thành giữa phân tử polyamid và chất cần tách. Lớp mỏngpolyamid được vốn để làm tách những chất phenol, acid carboxylic, steroid, quinon, hợpchất nitro thơm. Nhựa trao đổi ion laọi ionit vô cơ – hữu cơ: là loại silicagel được sunfonhóa (hoặc gắn những gốc có kĩ năng trao đổi ion khác); đó là catonit có nhóm –SO3Hnên trọn vẹn có thể sử dụng trong môi trường tự nhiên vạn vật thiên nhiên acid mạnh.Sephadex: Sephadex là tên gọi thương mại vốn để làm chí một nhóm những geldextran đã được biến hóa. III.2. Bản mỏngCác bản mỏng dính vốn để làm sắc kí chia thành hai loại: bản mỏng dính dính chắc và bản mỏngkhông dính chắc – Bản mỏng dính dính chắc : dùng chất hấp phụ đựợc trộn thêm 5-15% chất kết dính(thạch cao, tinh bột, dextrin). Bản mỏng dính trọn vẹn có thể sẵn sàng bằng phương pháp sau: Dùng những tấm kính có kích cở rất khác nhau đã rửa sạch bằng sulfocromic, xàphòng, nước và sấy khô. Chuẩn bị bột nhão (ví dụ nước và silicagel có 5% thạch caotỷ lệ 2:1) bằng phương pháp nghiền kỹ bột, thêm khoảng chừng 70% lượng nước, đánh đều không đểcó bọt, thêm nốt nước trộn đều, toàn bộ làm trong tầm 1-2 phút .Rải ngay hỗn hợplên kính để được những lớp mỏng dính khoảng chừng 0.25-0.3mm.Với những tấm kính lớn, thường rải lớp mỏng dính bằng dụng cụ riêng.Với tấm kính nhỏcó thể đổ hỗn hợp lên những tấm kính rồi nghiêng, lắc đều lớp mỏng dính, để những bản mỏngnằm trên mặt phẳng khoảng chừng 15-20 phút cho se lại rồi sấy 30 phút ở 1100C để haotj hóalớp mỏng dính. Bản mỏng dính đượ cất trong bình hút ẩm. Nếu tráng bản mỏng dính bằng tay thủ công như trên trọn vẹn có thể dùng tỉ lệ nước cao hơn nữa.- Bản mỏng dính không dính chắc: rãi bột có hoạt độ thích hợp lên tấm kính (kính mởcàng tốt) và rải đều một đũa thép hai đầu dầy khoảng chừng 0.5-1 mm hoặc một đũa thủy tinh2 đầu lồng 2 đoạn ống cao su đặc. Có thể rải bằng dụng cụ riêng. III.3. Dung môiĐây là yếu tố trọn vẹn có thể thay đổi để đạt được mục tiêu phân tách, việc lựa chọn dungmôi không tồn tại một quy tắc nào rõ ràng mà thường phải sắc ký sơ bộ để thăm dò hệ dungmooi thích hợp.Nếu mẫu phân tích có ái lực yếu với chất hấp phụ nên dùng chất hấp phụ có hoạttính cao và dung môi ít phân cựcCBHD: Nguyễn Thị Diệp Chi6 10*20cm 10*20cm 20*30cm20*30cm 5*20cm 5*20cm Sắc ký lớp mỏng dính trong hóa thực vậtNếu mẫu thử có kĩ năng bị hấp phụ mạnh thì nên dùng chất hấp phụ có hoạt tínhyếu và dung môi phân cực mạnh. Hệ dung môi chọn càng đơn thuần và giản dị càng tốt và luôndùng loại dung môi tinh khiết Việc lựa chọn dung môi và chất hấp phụ rất quan trọng nên phải địa thế căn cứ vào mộtsố yếu tố sau: + Tính chất của hỗn hợp cần phân tách (độ hòa tan, độ phân cực, số lượng vàđặc tính những nhóm chức hóa học). + Khả năng hấp phụ của pha tĩnh + Độ bay hơi, độ nhớt, sự phân lớp và độ tinh khiết của hỗn hợp dung môi.Một số nhóm chức có kĩ năng hấp phụ theo thứ tự tăng dần như sau:CH=CH2 <OCH3 < C=O < CHO <SH < NH2 < OH tránh phải sự hít vàoAcetol và isopropanol có tính cháy caoChuẩn bị:Dung môi khai triển (phase mobile):100 ml ete dầu hỏa, 11ml isopropanol, nướcChuẩn bị bình sắc ký(Preparation of the TLC chamber:)Dung môi khai triển cho vào trong bình bao trùm đáy một độ sâu 0.5cm. Đậy nắp, chờ dung môi bão hòa hơi nước.Chiết sắc tố lá (extraction of the leaf pigment):Lá tươi nghiền với 22 ml acetol, 3 ml dầu hỏa và một thìa CaCO3, dung dịch saulọc cho vào phễu tách cùng 20 ml ete dầu hỏa và 20 ml NaCl 10%. Chờ dung dich táchlớp, lớp dưới cho vào becker, lớp trên đem rửa 3-4 lần với 5ml nước. Rồi cho vàoErlen và làm khô với 4 thìa Na2SO4, tiếp sau đó rót vào trong bình đáy tròn sấy còn khoảng chừng 3mlChấm dịch chiết lên bản mỏng dính (Application of the extract to the TLC plate)Vẽ 1 đường thẳng cách đáy bản 1.5 cm bằng viết chì, dùng ống pasteur chấm dịch chiết lên bản, tái diễn nhiều lần đến khi có màu xanh đậm, vết chấm sau này được tiến hành sau khoản thời hạn được sấy khô vết chấm trước, hàng chấm được mỏng dính và thẳng là tốtCBHD: Nguyễn Thị Diệp Chi15Sắc ký lớp mỏng dính trong hóa thực vậtThí nghiệm: (Experimental procedure)Bản được đặt thận trọng vào trong bình với hàng kẽ mẫu ở đáy, giử thẳng không cho chạmvào thành bình, đậy bình, giử bản mỏng dính đứng yên, khi dung môi khai triển được ¾ bảnthì lấy bản ra và ghi lại vết ngay lập tức.Sắc tố lá được tách bằng TLCKết quả và thảo luận: (Results and discussion)Khi chấm mẫu lên bản bởi mao quản, thành phần của hỗn hợp sắc tố được phân ra bởi pha động và pha tĩnh (silicagel), tùy vào sự hấp thụ rất khác nhau và độ mạnh mẽ của dung dịch. Thành phần nào mạnh sẽ giử lại pha tĩnh, thành phần yếu dịch chuyển cùng pha động. Tuy nhiên, vận tốc dịch chuyển tùy thuộc vào dịch triết trong dung môiSự tách hổn hợp nhuộmLipophilic(Separating of Lipophilic Dye Mixture bythin layer chromatography) µ Hóa chất: (Chemicals) Dung môi thử nghiệm: Hỗn hợp nhuộm (Butter Yellow, Sudan Blue II, Sudan Red G and Indophenol in toluene) Dung môi tìm hiểu thêm: (Sudan Red G and Sudan Blue II each dissolved in toluene. CBHD: Nguyễn Thị Diệp Chileaf pigments colorcarotenes goldenpheophytin olive greenchlorophyll a blue greenchlorophyll b yellow greenlutein yellowviolaxanthin yellowneoxanthin yellow16Sắc ký lớp mỏng dính trong hóa thực vật Dung môi khai triển: TolueneNguyên liệu và dụng cụ thủy tinh (Glass wares and materials) Bình sắc ký: (jam glass with a screw cover, h = 11 cm d = 5 cm) DC plate POLYGRAM® ALOX N/UV254 (Macherey Nagel) Mao quản thủy tinh (1 µL)Nguy hiểm và Đk bảo vệ an toàn và uy tín (Hazards and safety precautions: Toluene rất độc khi hít vào, ăn vào hay hấp thụ vào da, gây kích thích nghiêm trọng, sinh quái thai học.=> Kính bảo lãnh bảo vệ an toàn và uy tín và găng tay được yêu cầu. Thí nghiệm được tiến hành trong một tính rõ ràng toàn vẹn, tuân thủ qui định phòng thí nghiệm, đảm bảo bảo vệ an toàn và uy tín.Thí nghiệm: (Experimental procedure)Một đường thẳng được vẽ cách đáy bản 1 cm bằng viết chì. Dùng mao quản 1µlchấm dung môi tìm hiểu thêm ở vị trí 1 & 3, vị trí 2 là hỗn hợp nhuộm. Thao tác lấy mẫucần nhanh, gọn.Khi hơi dung môi bảo hòa, bản mỏng dính đưa vào thận trọng với hàng kẽ mẫu ở dưới vàtránh sự tiếp xúc của dung môi và mẫu thử. Đậy nắp bình, giử cố định và thắt chặt bản mỏng dính, khi mức dungmôi lên khoảng chừng ¾ bản thì lấy ra và ghi lại vị trí của bộ sưu tập tại thời gian lúc đó.Kết quả (Result)Mẫu thử tách ra nhiều thành phần, mức độ phân loại trọn vẹn có thể quan sát sự dịch chuyển của điểm màu. Qua đó, so sánh với dung môi tìm hiểu thêm.Cơ sở quy trình (background):Phân tích định tính những thành phần cần tách trong TLC được nhờ vào sự so sánh tỷ trọng di trú của những chất. Nhân tố duy trì, giá trị Rf đựơc sử dụng đặc trưng và so sánh những thành phần của bộ sưu tập rất khác nhau.CBHD: Nguyễn Thị Diệp Chi17Sắc ký lớp mỏng dính trong hóa thực vậtGiá trị Rf đựơc tái tạo, không khí trong bình khai triển phải bảo hòa với dung môi, thành phần của pha động và nhiệt độ phải không thay đổi.CBHD: Nguyễn Thị Diệp Chi18Sắc ký lớp mỏng dính trong hóa thực vậtTÀI LIỆU THAM KHẢO µ 1. Giáo trình “Các phương pháp phân tích tân tiến” – Nguyễn Thị Diệp Chi2. chemguide.co.uk3. www .chem.ucla.edu4. chemvn.netCBHD: Nguyễn Thị Diệp Chi19
Reply
4
0
Chia sẻ
– Một số Keyword tìm kiếm nhiều : ” Review Hệ dung môi trong sắc ký lớp mỏng dính tiên tiến và phát triển nhất , Share Link Tải Hệ dung môi trong sắc ký lớp mỏng dính “.
Bạn trọn vẹn có thể để lại Comments nếu gặp yếu tố chưa hiểu nghen.
#Hệ #dung #môi #trong #sắc #ký #lớp #mỏng dính Hệ dung môi trong sắc ký lớp mỏng dính